Espectrometría de masas: cómo se confirma la identidad.
La espectrometría de masas (MS) mide la relación masa/carga de los iones del péptido. La masa observada se compara con la masa teórica calculada a partir de la secuencia; la concordancia dentro de la tolerancia del método respalda la identidad molecular.
Masa teórica frente a masa observada
Cada secuencia de aminoácidos tiene una masa que se calcula con precisión. El equipo mide la masa real de la muestra y el análisis compara ambas: una diferencia dentro de la tolerancia del método confirma que la molécula corresponde a la secuencia esperada.
Se usan dos masas de referencia. La masa monoisotópica suma los isótopos más abundantes de cada átomo y se compara en equipos de alta resolución; la masa promedio pondera la abundancia natural de los isótopos y aparece en equipos de menor resolución. El COA identifica la referencia utilizada.
Por qué la masa no aparece tal cual
| Término del espectro | Interpretación |
|---|---|
| [M+H]⁺ | La molécula se detecta con un protón de más; la masa observada es la del péptido más ~1 |
| Iones multicargados | Un péptido grande aparece con 2, 3 o más cargas a la vez |
| m/z | Masa dividida entre carga: es el eje del espectro, no la masa directa |
| Desconvolución | El cálculo que reconstruye la masa real a partir de los iones multicargados |
| Tolerancia (Da o ppm) | El margen permitido entre masa observada y teórica para dar por confirmada la identidad |
Alcance de la espectrometría de masas
La MS respalda la identidad y puede detectar impurezas relacionadas que cambian la masa, como secuencias truncadas o modificaciones. La HPLC estima la pureza relativa a partir de las señales separadas y detectadas bajo su propio método.
La MS contrasta la identidad mediante la masa observada y el HPLC caracteriza la pureza cromatográfica. El COA reúne ambos resultados porque responden a propiedades analíticas distintas.
Preguntas frecuentes: Espectrometría de masas: cómo se confirma la identidad
¿Qué diferencia hay entre masa monoisotópica y masa promedio?
La masa monoisotópica suma los isótopos más abundantes de cada átomo y se utiliza en equipos de alta resolución; la masa promedio pondera la abundancia natural de los isótopos. El COA identifica la referencia utilizada.
¿Por qué la masa observada no es igual a la teórica exacta?
Porque el péptido se detecta ionizado: como [M+H]+ suma la masa de un protón, y los péptidos grandes aparecen con carga múltiple. El software reconstruye la masa real por desconvolución.